Несмотря на широкое внедрение в бактериологическую практику методов генодиагностики и геноиндикации, классический бактериологический метод остаётся «золотым стандартом» при диагностике большинства современных инфекций. Этот метод предполагает посев материала на агаризованные питательные среды с последующим выделением и идентификацией чистой культуры микроорганизма.
Основной недостаток классического метода – длительность исследования. Так, по быстро растущим микробам результат может быть получен не ранее, чем через 2-3 суток после посева на агаризованную среду. Для ускоренной идентификации выделяемых культур в состав сред для первичного посева или накопления чистой культуры обычно вводят дифференцирующие субстраты и соответствующие индикаторы. В классическом варианте – это углеводы (лактоза, сорбит, сахароза и т.д.), мочевина или другие субстракты, при расщеплении которых микробными ферментами образуются вещества, изменяющие рН или окислительно-восстановительный потенциал среды.
В результате появления продуктов ферментации индикатор окрашивает, например, колонии микробов и среду вокруг, помогая отличить их от бесцветных (неокрашенных) колоний микробов, не ферментирующих данный субстрат. Дифференциация при таком подходе осложняется тем, что сахаролитические и протеолитические ферменты микроорганизмов весьма многообразны и универсальны (часто встречаются у представителей разных видов). Это обусловливает относительно невысокие дифференцирующие свойства традиционных сред. Для более четкой дифференциации культур у них желательно определять родо или видоспецифические ферменты. В конце XX века в бактериологическую практику вошли дифференциальные среды нового поколения – хромогенные, принцип действия которых основан на выявлении высокоспецифичных ферментов у искомых микроорганизмов. К таким ферментам относятся, например, бета-D-глюкуронидаза Esherichia coli или бета-D-глюкозида энтерококков.
Для обнаружения уникального фермента и идентификации микроорганизма. В состав среды вводят хромогенный субстрат-вещество, при расщеплении которого этим ферментом образуются окрашенные или флюоресцирующие продукты. В результате микробный рост окрашиваются в определенный цвет или приобретает способность к флюоресценции при ультрафиолетовом облучении. Поскольку хромогенный субстрат или их смесь вводятся в состав сред (в том числе селективных) для первичного посева, то результат – выделение чистой культуры и её идентификация – может быть получен уже в течении первых суток исследования. Иногда при этом требуется проведение быстрых подтверждающих тестов (например, капельный тест на индол с реактивом Ковача для E.coli). Хромогенные высококачественные среды немногих производителей предназначены для быстрого (в течение 24ч) обнаружения в исследуемом материале целого ряда микроорганизмов, имеющих большое значение клинической и санитарной микробиологии: (E.coli и другие колиформные бактерии, сальмонеллы и энтерогеморрагические эшерихии, энтерококки,S.aureus, клостридии и синегнойная палочка, а также candida albicans и другие грибы, бактерии.)
Статья подготовлена специалистами отдела ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБУ «Центральная научно-производственная ветеринарная радиологическая лаборатория».
